video pupuk organik

PUPUK ORGANIK

PUPUK ORGANIK

PANGANHOLTICULTUR

TEKNOLOGI BENIH

AKLIMATISASI

PEMBUATAN MEDIA

PEMBUATAN MEDIA

1.        Pengertian Media

Media merupakan faktor penentu dalam perbanyakan dengan kultur jaringan.  Komposisi media yang digunakan tergantung dengan jenis tanaman yang akan diperbanyak. Media yang digunakan biasanya terdiri dari garam mineral, vitamin, dan hormon.  Selain itu, diperlukan juga bahan tambahan seperti agar, gula, dan lain-lain.  Zat pengatur tumbuh (hormon) yang ditambahkan juga bervariasi, baik jenisnya maupun jumlahnya, tergantung dengan tujuan dari kultur jaringan yang dilakukan. 

2.        Komponen-komponen Media dan Kegunaannya

Media tanam kultur jaringan terdiri dari sejumlah unsur yang  diperlukan untuk pertumbuhan eksplan dalam lingkungan buatan, unsusr-unsur ini umumnya tedapat di tanah.  Komponen media kultur jaringan dapat dikelompokkan kedalam berikut ini.     

a.         Unsur makro,  terdiri dari unsur-unsur: nitrogen (N), fosfor (P), kalium(K), kalsium(Ca), magnesium(Mg), dan sulfur(S)

b.         Unsur mikro, terdiri dari: boron(B), cobalt(Co), tembaga (Cu), Iodium(I),  besi(Fe), mangan(Mn), molybdenum(Mo), dan seng(Zn)

c.         Vitamin (vitamin B1) dan Myo-inositol, pada beberapa formula media terkenal juga menambahkan niasin dan piridoksin (B6)

d.         Gula (sukrosa), sebagai sumber energi

e.         Zat pengatur tumbuh, untuk merangsang dan mengontrol pertumbuhan

f.          Agar, sebagai pemadat media

g.         Arang aktif, sebagai penyerap senyawa racun (jika diperlukan)

h.         Air(aquades), sebagai pelarut

3.        Formulasi Media

Terdapat banyak formula media tanam kultur jaringan yang pada umumnya diberi nama sesuai dengan nama penemunya, antara lain:

a.     Murashige  dan  Skoog (MS),  memiliki  kisaran  pemakaian  yang paling luas

b.    Gamborg atau B-5, cocok untuk kultur suspensi sel kedelai dan legum

c.     Vacin Went (VW), digunakan untuk media anggrek

d.    Nitsch dan Nitsch, digunakan untuk kultur tepung sari dan kultur sel

e.     Schenk dan Hildebrandt (SH) digunakan untuk media tanam dikotil

f.     Woody plant Plant Medium (WPM) digunakan untuk media tanaman berkayu

Tabel 1.  Komposisi bahan kimia pada beberapa formulasi media (mg/l)

Unsur makro	VW	SH	MS	B-5	WPM	Nitsch
KNO3	80	2500	1900	2500	-	950
NH4NO3	-	-	1650	-	400	-
(NH4)2 SO4	-	-	-	134	-	-
NH4H2PO4	-	300	-	-	-	-
CaCl2 2H2O	-	151	332,2	150	96	166
Ca(NO3)24H2O	285	-	-	-	556	-
KCl	65	-	-	-	-	-
KH2 PO4	-	-	170	-	170	68
MgSO47H2O	740	400	370	250	370	185
Na2SO4	200	-	-	-	-	-
NaH2PO4 H2O	16,5	-	-	130,5	-	-
Unsure Mikro
MnSO4.4H2O	7	13,2	16,9	10	29,4	25
ZnSO4.7H2O	2,67	1	8,6	2	8,6	10
H3BO3	1,5	5	6,2	3	6,2	10
KI	0,75	0,1	0,83	0,75	-	-
CuSO4 5H2O	0,01	0,2	0,025	0,025	0,25	0,025
NaMoO3	0,001	-	-	-	-	-
NaMoO4.2H2O	-	0,1	0,25	0,25	0,25	0,25
CoCl2 6H2O	-	0,1	0,025	0,025	-	-
FeSO4 7H2O	-	15	27,8	27,8	27,8	27,8
Fe2(SO4)3	2,5	-	-	-	-	-
Na2 EDTA	-	20,1	37,3	37,3	37,3	37,3
Vitamin
Mio-inositol	-	1000	100	100	100	100
Tiamin HCl	0,1	5	0,1	10	0,1	0,5
Piridoksin HCl	0,1	0,5	0,5	0,1	0,5	0,5
Asam nicotin	0,5	5	0,5	1	0,5	5
Glisin	3	-	2	-	2	2
Biotin	-	-	-	-	-	0,2

 Sumber; Sutter EG dalam trigiano, RN dan DJ gray (1996)

4.               Menentukan pH larutan media

Tingkat keasamaan larutan media juga menentukan keberhasilan dalam perbanyakan secara kultur jaringan. pH yang dibutuhkan tanaman berkisar antara 5,6 - 5,8. Pengukuran pH dilakukan dengan menggunakan pH meter, atau bila menginginkan yang lebih praktis dan murah dapat digunakan kertas pH (kertas lakmus). Akan tetapi pengg unaan kertas lakmus kurang akurat dibandingkan dengan penggunaan pH meter. Apabila pH larutan media dibawah ketentuan di atas maka perlu ditambahkan NAOH 1-2 tetes sedangkan apabila pH larutan media di atas ketentuan maka perlu ditambahkan HCl 1-2 tetes. Media yang mempunyai pH asam atau basa sangat mempengaruhi pertumbuhan tanaman di dalamnya. Keadaan media yang terlalu asam akan membuat media menjadi tidak padat, sehingga tanaman tidak akan dapat berdiri dengan tegak dan tidak dapat menyerap nutrisi secara optimal. Sedangkan media yang terlalu basa akan membuat tanaman yang tumbuh di dalamnya menjadi keriting atau bahkan mati. Oleh karena itu pengukuran pH perlu diperhatikan, Untuk menjaga keseimbangan larutan media.

Manfaat pH dalam media tanam adalah untuk :

·                Menjaga kestabilan membrane sel dan sitoplasma

·                Membantu penyerapan unsur hara

·                Mengatur sifat padat  pada agar (dalam media padat)

5.             Alur pembuatan media

 

               

                     

6.                  Menentukan Jenis Dan Komponen Larutan Stok

Sebelum melakukan kegiatan pembuatan media, perlu dilaksanakan pembuatan larutan stok. Larutan stok adalah larutan yang konsentrasinya dipekatkan atau ditinggikan dari konsentrasi dalam media.  Biasanya dinyatakan dalam kelipatan konsentrasi media, misalnya 10x, 20x, 100x, bahkan 1000x konsentrasi media. Tujuan pembuatan larutan stok adalah untuk menghindari penimbangan yang berulang-ulang setiap kali membuat media.  Disamping itu, kadang-kadang timbangan untuk menimbang bahan-bahan dalam jumlah yang sangat kecil tidak tersedia di laboratorium. Pembuatan larutan stok didasarkan pada pengelompokan-pengelompokan yaitu: stok makro, stok mikro, stok Fe (besi), stok vitamin dan stok hormon. Stok hormon dapat disimpan antara 2- 4 minggu, sedangkan hara dapat disimpan 4 – 8 minggu.  Dengan adanya larutan stok, pembuatan media selanjutnya tinggal mengencerkan larutan stok saja.

7.                  Menghitung Kebutuhan Larutan Stok

Tabel 1. Konsentrasi Bahan/Larutan Stok Pada Media MS (mg/l) dan Volume Pengambilan Sok untuk Bahan Pembuatan Media

No.	Bahan/Stok	Pemekatan	MS (mg/l)	Konsentrasi stok (mg/l)	Vol. stok diambil
1.	Stok Makro NH4NO3 KNO3 CaCl2.2H20 KH2PO4 MgSO4.7H2O	10x 10x 10x 10x 10x	1.650 1.900 440 170 370	16.500 19.000  4.400 1.700 3.700	100 ml 100 ml 100 ml 100 ml 100 ml
2.	Stok mikro H3Bo3 Na2MoO4.7H2O CoCl2.6H2O KI MnSO4 ZnSO4.7H2O CuSO4.5H2O	100x 100x 100x 100x 100x 100x 100x	6,2 0,25 0,025 0,83 16,9 8,6 0,025	620 25 2,5 83 1.690 860 2,5	1 ml 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml
3.	Stok Fe EDTA FeSO4.7H2O Na2EDTA	10x 10x	27,8 37,3	278 373	100 ml 100 ml
4.	Stok Vitamin Tiamin-HCl, Piridoksin-HCl Asam nikotinat Glisin	10x 10x 10x 10x	0,1 0,5 0,5 2,0	1 5 5 20	100 ml 100 ml 100 ml 100 ml
5.	Stok Mio Mio-inositol	10x	100	1.000	100 ml
6.	Stok Hormon ZPT (BA, NAA)	100 ppm	ses.kbt	100
7.	Sukrosa Agar-agar		30.000 ±8.000	Tdk dibuat stok

Rumus pengambilan lar.stok

 

Dimana:

Vs = Volume stok yang diambil

Cs = Konsentrasi stok

Vm = Volume media yang dibuat

Cm = konsentrasi media

Contoh soal :

Berapakah pengambilan stok KNO₃ yang diambil dari stok yang dipekatkan 10x,  Apabila akan membuat media 1000 ml?

Jawab :

Vs x Cs = Vm x Cm

Vs x 19.000 = 1000 x 1.900

Vs               = 1.900.000

                        19.000

                    = 100 ml

8.               Membuat larutan stok

Adapun alur pembuatan larutan stok adalah sebagai berikut :

Pada Unsur hara makro, mikro dan vitamin dilarutkan dengan aquadest steril. Sedangkan Pada stok hormon pelarutan menggunakan NAOH, HCl atau alkohol. Hormon jenis sitokinin menggunakan pelarut HCl atau alkohol. Untuk hormon jenis auksin pelarutan menggunakan NAOH.

Teknik pembuatan stok Fe EDTA berbeda dengan pembuatan stok yang lain. Pada pembuatan stok ini dilakukan pemanasan di atas hot plate stirer.

9.                  Menyimpan larutan stok

Kondisi penyimpan larutan stok perlu diperhatikan, karena ada beberapa bahan yang tidak tahan dalam suhu tinggi atau cahaya.  Larutan stok kadang-kadang juga ditumbuhi oleh mikroorganisme, larutan stok yang terkontaminasi ini tidak dapat digunakan lagi.